Метод мембранных фильтров в анализе воды

Для чего применяют метод мембранных фильтров

Метод используют для санитарно-бактериологического контроля питьевой, природной, бутилированной, технологической и очищенной сточной воды. Он особенно полезен при анализе чистой воды: микроорганизмов в ней мало, и прямой посев может их не показать.

Методика позволяет выявлять и количественно учитывать:

• бактерии группы кишечных палочек (БГКП) и колиформные бактерии;
• термотолерантные колиформы и кишечную палочку (Escherichia coli);
• энтерококки (фекальные стрептококки);
• синегнойную палочку (Pseudomonas aeruginosa);
• споры сульфитредуцирующих клостридий;
• дрожжевые и плесневые грибы.

Анализ выполняют по стандарту или методике вашей лаборатории: они задают объём пробы, среду, температуру и время.

Какие мембраны используют для анализа

Для бактериологического анализа воды применяют специализированные мембранные фильтры для микробиологии. Это тонкие гидрофильные диски: через них проходит вода и питательные вещества среды, а бактерии остаются на поверхности.

Что нужно от фильтра:

• Материал: смесь эфиров целлюлозы или нитрат целлюлозы. Они хорошо смачиваются и подходят для выращивания колоний.
• Размер пор: 0,45 мкм. Такой размер обычно указан в методиках анализа воды. Если методика требует другой размер, ориентируйтесь на неё.
• Диаметр: 47 мм (базовый стандарт для большинства фильтрационных воронок) или 50 мм.
• Стерильность: диски должны быть стерильными, обычно в индивидуальной упаковке.

Зачем нужна сетка и черный цвет мембраны

Сетка делит мембрану на квадраты. Так проще считать колонии (КОЕ) и не посчитать одну и ту же дважды.

Цвет подложки выбирают в зависимости от типа микроорганизмов и применяемой среды:

• Белые мембраны: применяют при исследовании на колиформы и патогены на средах, формирующих темные, красные или металлически блестящие колонии (например, среда Эндо).
• Черные мембраны: создают четкий контраст для бесцветных, белых или кремовых колоний, дрожжей и мицелиальных грибов, а также используются при эпифлуоресцентном контроле.

Что нужно для проведения анализа

Что нужно для фильтрации:

• Фильтрационный коллектор: одноместный держатель или многоместная гребёнка.
• Воронки: стерилизуемые многоразовые или одноразовые стерильные воронки.
• Вакуумный насос: насос со стабильным разрежением, колба-сборник и гидрофобный фильтр для защиты насоса от влаги.
• Пинцет: инструмент с гладкими плоскими губками без зубцов, чтобы исключить механический прокол мембраны при переносе.
• Чашки Петри и среды: стерильные чашки с плотной средой или подложки с жидкой средой, как требует методика.
• Инкубатор: термостат на температуру из методики.

Этапы анализа по шагам

Анализ состоит из шести шагов:

• 1. Подготовка: рабочую зону бокса протирают дезинфицирующим раствором, монтируют фильтрационную систему, пинцет стерилизуют и дают ему остыть.
• 2. Укладка фильтра: стерильным пинцетом извлекают мембранный диск и кладут его на пористый столик сеткой вверх точно по центру.
• 3. Фильтрация: устанавливают воронку, заливают отмеренный объём пробы и включают вакуумный насос. Разрежение держат в пределах, указанных в методике: слишком сильное может повредить мембрану и снизить выделение микроорганизмов.
• 4. Ополаскивание: после прохождения пробы стенки воронки обмывают стерильной жидкостью, которую задаёт методика, чтобы смыть осевшие бактерии на фильтр.
• 5. Перенос: воронку снимают, пинцетом берут фильтр за край и плавно накатывают его сеткой вверх на поверхность агара, исключая образование пузырьков воздуха под мембраной.
• 6. Инкубация и учет: чашки закрывают и помещают в термостат. Положение чашек, время и температура – по методике вашей лаборатории. Затем считают выросшие колонии по сетке.

Частые ошибки при мембранной фильтрации

Что чаще всего искажает результат:

• Воздушные карманы: пузыри воздуха между мембраной и агаром изолируют бактерии от питательной среды, из-за чего колонии в этих зонах не развиваются.
• Прокол мембраны: использование пинцетов с насечками повреждает пористую структуру фильтра, и часть микроорганизмов смывается в фильтрат.
• Неправильная сторона: размещение фильтра сеткой вниз нарушает контакт клеток со средой и искажает колониеобразование.
• Слишком глубокий вакуум: превышение допустимого разрежения может снизить выделение микроорганизмов и повредить мембрану.
• Горячая воронка или пинцет: неостывший после обжига металл может убить микроорганизмы.
• Фильтрация взвеси без разведения: при анализе мутной воды мембрана быстро забивается осадком, а колонии сливаются, и их трудно посчитать.

Нужен фильтр под вашу задачу? Посмотрите стерильные мембраны с сеткой и мембранные фильтры 0,45 мкм или воспользуйтесь подбором на главной.